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ELISA实验之样本前期的处理方法

更新时间:2023-04-18      浏览次数:404

实验检测的样本是有多种类型的,如血清、血浆、尿液、细胞培养上清或组织匀浆液等,不同类型的检测样本前期的处理方法是不一样的。

一、均质

1、组织样本:肉、肝食品类切细,用绞肉机反复绞碎,混合均匀。

2、水产样本:去除样品的非食用部分,食用部分切细,用均质器均浆。原料表面较脏时,需适当用蒸馏水清洗。

3、蛋类:鲜蛋去壳,蛋黄和蛋白充分混匀。

4、水果、蔬菜类:先用水洗去泥沙,然后除去表面的水分,取食用部分。

二、振荡提取

将提取溶剂加入到装有样品的具塞容器中,振荡,使提取溶剂与容器内的样品充分接触以深入到样本组织内部,提取待测组分。振荡方式主要就是用振荡器进行上下、往返式振荡、手摇式上下振荡。在组织样本中加入有机溶剂之间提取时,应边加边振荡,防止组织凝结成团,不利于提取。

三、浓缩

由于净化过程中引入的溶剂,可能会降低待测组分的浓度或者不适宜直接分析,需要去除全部有机溶剂。即试剂盒前处理步骤中把样本在60℃氮气下吹干,再用复溶液溶解干燥残留物。浓缩方式包括用氮气吹干除杂、压缩空气吹干除杂等。

请注意:

1、在吹干样本之前,用甲醇清洗针头,防止杂质干扰。

2、在吹样本时,针头应在液面上空,避免与样本接触,防止产生交叉污染。

3、样本吹干后应立即取下,避免吹的时间过长,影响最终检测结果。

4、不同的药物,吹干后样本的保质期不同,提倡待样本回到室温后立即复溶。

四、乳化现象

在用有机溶剂提取过程中,如果出现乳化现象,解决的方法有:

1、用细头轻轻的搅拌,破坏乳化后,再重复离心。

2、再加入适量的提取剂,重新振荡。注意离心后要保证样本的稀释倍数不变。

五、净化

经过提取的待测组分中通常含有一些会干扰试剂盒中抗原抗体反应的杂质或者是含有与待测物结构相似的杂质。将待测组分与杂质分离的过程,我们称为试剂盒中样本的净化。在我们现有的试剂盒前处理方法中涉及到的最常见的净化是液液分配法。比如,用复溶液溶解干燥残留物之前先加入适量的正己烷,在加入正己烷和复溶液涡动后如果出现乳化现象,可以用60℃水浴加热,至乳化现象消失或减弱后,加大离心转速进行离心。


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